给予终生激素替代治疗前，垂体功能减退诊断必须确立，应该有垂体形态异常和激素缺乏依据。蝶鞍的头颅X线和视野测定将证明肿瘤存在。高分辨率CT或MRI(当需要时用强化剂)是首选方法。当无高分辨率CT时。可采用蝶鞍多分层摄片。阳电子流分层摄片在少数特殊中心用作研究工具。脑血管造影仅仅是当X线检查提示鞍旁血管异常或血管瘤时出现指征。当无现代神经放射设备时，对直径>10mm垂体腺瘤，简单的低聚焦筒(coned-down)垂体侧位片仍然是合理的首选方法。
甲状腺功能评估 放射免疫法可以测定T4，T3和TSH。应该是所有水平降低，因TSH增高示原发性甲状腺功能异常。用合成TRH200~500μg静脉推注可以鉴别下丘脑病变抑或是垂体自身病变。SH对TRH反应峰值一般见于注射后30分钟，下丘脑疾病TSH呈升高延迟。遗憾的是，有些原发性垂体病的病人也有这种类型反应，另一些垂体病，SH对TRH反应可以无任何TSH增加。 ACTH分泌的评估 一些肾上腺皮质功能减退病人基础血皮质醇在正常范围，但降低了贮备功能，对一个或更多ACTH-肾上腺轴心兴奋试验反应低下。评估 ACTH(及GH和PRL)贮备的最可靠方法是胰岛素耐量试验，剂量为正规胰岛素0。1u/kg体重，在15~30秒内静脉推注，零时(胰岛素推注前)，然后20，30，45，60和90分钟采集静脉血测定GH皮质醇和葡萄糖水平。如血清葡萄糖稍许下降未达50%至<40mg/dl(2.22mmol/L)，试验应重复。
垂体
功能减退或DM和老年病人可有意外，对缺血性心脏病和癫痫病人是禁忌证。试验过程中，应有医护人员在旁)。通常仅有一过性多汗，心动过速，神经质。如病人主诉心悸，意识丧失，癫痫发作，试验应立即终止，静脉推注50%葡萄糖。
胰岛素耐量试验不能区别原发性(艾迪生病)和继发性(垂体功能减退)肾上腺皮质功能不足。这一区别和评估下丘脑-垂体-肾上腺轴心试验在第9节艾迪生病实验室检查中描述。
PRL的评估 全垂体减退病人，PRL不总是被抑制。事实上，在下丘脑疾病由于丧失多巴胺对PRL抑制，可以有PRL增高。高催乳素血症结果，常伴有促性腺激素过低和继发性性功能减退。
GH的评估 成人不主张做GH缺乏常规筛选，因为即使发现GH缺乏，习惯上不作处理，除非骨骺尚未闭合的身材矮小病人。成人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)正常提示不存在GH缺乏，然而低值不证明GH缺乏。
儿童中GH测定一般有帮助，但只有兴奋试验后才有意义。由于甲状腺和肾上腺减退病人，GH反应一般是异常的，做激发试验必须在足够激素替代治疗后。胰岛素耐量试验可最有效地兴奋GH释放。危险性较小且也较小可靠的是精氨酸GH释放试验(500mg/kg，静脉滴注30分钟)，左旋多巴口服(成人500mg，儿童10mg/kg)，睡眠或20分钟剧烈运动后。可乐定(4μg/kg口服)是另一种GH释放强大兴奋剂，有希望替代胰岛素。副反应仅仅是嗜睡和轻度血压下降。一般来讲，测定GH>10ng/ml或兴奋后GH反应>5ng/ml足以排除GH缺乏。GH增加<5ng/ml或兴奋后仍<10ng/ml，这一结果难以解释。 正常反应的标准是人为决定，所有激发GH分泌试验偶尔可以产生误导结果。因为激发GH释放没有任何一个单独试验100%有效，缺乏GH反应时，至少应做两个不同试验。给胰岛素和精氨酸后，GH峰值介于30~90分钟，口服左旋多巴后GH峰值介于30~120分钟，开始熟睡，可乐定和剧烈运动20分钟后，GH峰值介于60~120分钟。
外源性GHRH评估GH分泌价值尚未定论。正常人，GHRH1μg/kg，静脉推注11~30秒钟可导致最大，但有变化的GH释放。典型的在GHRH推注后约60分钟达峰值。垂体对GHRH反应的变化与间歇性下H产生这一假设一致。猜测缺乏或减少GH对GHRH的反应将证明病人有GH缺乏，但反应类型能否区别原发性下丘脑与垂体自身病变仍不清楚。儿童GH缺乏，可能是继发于GHRH缺乏。GH对GH-RH高度可变反应已见报道。
已知激发试验不能发现调节GH释放的轻度缺陷，例如，继发于GH分泌功能障碍的身材矮小儿童，GH释放的激发试验通常是正常。然而，12~24小时进行系列GH测定，指示这些儿童12~24小时GH分泌总和低于正常。
血清LH和FSH的评估 未用外源性雌激素更年期妇女，在基础状态测定这些激素对评估垂体功能减退最有帮助。这些更年期妇女，通常GnH是高的(>30mIU/ml)。测基础LH和FSH对另一些人很少有帮助。虽然全垂体功能减退GnH低下，但与LH和FSH的正常值有重叠。合成GnRH100μg静脉给予，LH和FSH应该有反应性增加。GnRH 注射后LH峰值约在30分钟，FSH峰值在40分钟。然而，对GnRH反应正常，低下，缺乏可见于下丘脑-垂体功能障碍。LH和FSH对GnRH反应的正常增加有很大变化，用外源性GnRH无助于原发性下丘脑和原发性垂体病的鉴别。
多种激素的评估 同时测定几种垂体激素贮备是评估垂体功能最有效的方法。胰岛素(正规胰岛素0.1u/kg)，TRH(200μg)，GnRH(100μg)一起15~30秒钟内静脉推注，180分钟内多次测定血糖，皮质醇，GH，TSH，PRL，LH，FSH 和ACTH。另一方法是胰岛素单独用，120分钟后同时给予TRH和GnRH。根据建议GHRH(1μg/kg)，CRH(1μg/kg)和 TRH，GnRH一起静脉推注，胰岛素没有必要作为联合前垂体功能试验一个部分，这些释放激素在垂体试验中的应用仍待建立。在任何情况下，正常反应同以前所述。
