多数病例通过涂片、培养和组织病理学方法获得诊断。
1.直接镜检 血液、胸腔积液、痰液或其他分泌物的直接镜检是最简便而快捷的诊断方法，光镜下可见双壁圆形8～20μm大小的单芽孢子，芽颈较粗。活检标本的组织病理学检查也是建立诊断的良好方法，但需做PAS染色、六胺银染色等特殊染色。
2.细菌培养 较易生长，但生长缓慢，常规的培养需数周。
3.皮肤试验 主要用于流行病学调查，目前尚无可供临床使用的抗原。
4.血清学试验 有补体结合试验、免疫扩散法和酶免疫测定法等方法，特异性高而敏感性较差。
X线胸片上可有肺部病灶和(或)肺门、纵隔淋巴结肿大。