HSV易从活动病变中被分离，如疱疹液、鼻咽、眼结膜、呼吸道分泌、脑脊液、尿及粪等，组织培养仅需时1～3天。
脱落细胞或疱疹基底刮片细胞学检查，病变细胞增大，有核内包涵体或呈多核巨细胞改变，虽阳性率可达60%～70%，但阳性改变非单纯疱疹病变所特有。近年采用单克隆或多克隆抗体染色，特异性及敏感性均较高。
HSV抗原或DNA检测，如聚合酶链反应(PCR)可快速诊断。血清学检查对诊断帮助不大，HSV两型间有交叉免疫反应。
并有肝病变者血清直接胆红素及转氨酶增高;脑病变者脑脊液细胞计数增高(包括红细胞、淋巴及单核细胞)，蛋白质增加。但正常者不能除外本病。脑电图可呈周期性慢波、尖波或多灶性放电，多局限于颞叶。CT脑扫描可见颞叶病变或脑皮质及脑室周围有低密度改变，部分病例可见出血或钙化灶。
B超、CT或脑电图检查常显示颅内颞叶局灶性病变;肺部X线多表现为间质性或网状颗粒状病变。