可作X线直立前后位平片检查，可见左上腹有一宽大液平面，右上腹亦有一液平面，此即为扩张的胃及十二指肠近段，整个腹部其他部位无气体，形成“双气泡征”，此为十二指肠闭锁的典型X线征象。十二指肠狭窄的平片与闭锁相似，但十二指肠近端扩张较轻，液平略小，余腹可见少量气体。在新生儿肠梗阻时，禁忌作钡餐检查，可引起致死性钡液吸入性肺炎，有时为了与肠旋转不良作鉴别，可作钡剂灌肠，观察盲肠、升结肠的位置。但实际上并非必要，因腹部平片所见，已可确定诊断。年长儿病史不典型，有十二指肠部分梗阻症状者，可作吞钡检查，检查后应吸出钡剂。
近年在产前应用超声断层扫描测得腹腔内有两个液性包块，对诊断有一定价值，可为出生后早期手术提供依据。
有十二指肠闭锁时，孕妇在妊娠早期可能有病毒感染、阴道流血等现象，常有羊水过多征。婴儿出生后数小时即发生频繁呕吐，量多，含有胆汁，如梗阻在壶腹部近端则不含胆汁。没有正常的胎粪排出，或可排出少量白色粘液或油灰样物，但亦可有1～2次少量灰绿色粪便。高度狭窄时的症状与闭锁相似。狭窄程度轻者，间歇性呕吐可出生后数周或数月出现，甚至在几年后开始呕吐。因属于高位梗阻，一般均无腹胀，或仅有轻度上腹部膨隆，胃蠕动波少见。因剧烈呕吐，有明显的脱水、酸碱失衡及电解质紊乱、消瘦和营养不良。