1.厌氧菌培养 伤口渗液送厌氧菌培养，可分离出肉毒梭菌。

2.外毒素检测 取早期病人血清培养，注入小白鼠腹腔内，另用对照小白鼠，在注射病人血清同时注入同型抗毒素。前者出现四肢瘫痪、失声和呼吸困难，而对照组小白鼠则不出现症状。

3.动物试验 用伤口分泌物生理盐水浸出液0.5～1ml，注入小白鼠腹腔内，亦能出现肌肉瘫痪。

4.血、尿、脑脊液检查一般正常。

肌电图：单次超大剂量神经刺激后，肌肉的动作电位振幅降低，有诊断价值。