1.24h尿游离皮质醇和17-羟皮质类固醇 二项指标均增高，经体表面积纠正后仍然高。单纯性肥胖儿童此值亦高，但纠正后不高。
2.血清皮质醇浓度 昼夜节律失调，正常情况下，早晨8∶00血浆皮质醇高于晚上11∶00浓度;如果节律失调，晚上分泌比早上高或相近时，有助诊断。
3.血浆ACTH测定 垂体病或异位性ACTH综合征时明显升高。
6h静脉注入ACTH刺激试验，可使库欣病和肾上腺腺瘤病人血浆皮质醇进一步升高，而在肾上腺癌，异位性ACTH综合征以及医源性库欣综合征时，皮质醇不增加。
4.地塞米松抑制试验
(1)过夜地塞米松试验：即夜11∶00服地塞米松1mg，若血浆皮质醇仍高而未被抑制，同时尿游离皮质醇亦增高，库欣综合征诊断可成立。
(2)小剂量地塞米松抑制试验：如过夜地塞米松抑制试验皮质醇分泌受到抑制，可进行此试验。服用2mg/d(0.5mg每6小时1次，共2天)的地塞米松。若仍未被抑制，提示皮质醇增多症的诊断。
(3)大剂量地塞米松抑制试验：即口服8mg/d(2mg每6小时1次，共2天)的地塞米松。主要用于鉴别皮质醇增多症的病因。如大剂量地塞米松仍不能抑制则为肾上腺腺瘤或癌可能性大。若被抑制可能为肾上腺皮质增生症。
血浆皮质醇或24h尿17-OH类固醇指标，经抑制后必须下降到对照值50%以下才为正常。
5.其他化验检查 血生化可见高钠，低钾性碱中毒。白细胞可增多，嗜酸细胞减少。
肾上腺影像学检查：
1.X线检查
(1)X线骨片： 脊柱片可见骨质疏松，四肢骨片可见皮下脂肪量增多，偶见有病理性骨折。腕骨片观察骨龄，显示骨龄增速，骨皮质普遍疏松.
(2)颅骨片：蝶鞍可显示增大。
(3)腹部平片和静脉肾盂造影：可见有无肾脏移位，肾上腺钙化等，必要时腹部肾上腺血管造影可确定肿瘤部位。
2.腹部肾上腺B型超声波检查 可有助于肿瘤的定位及大小诊断。
3.CT等检查 腹部CT，肾上腺部位CT扫描可确定肿瘤部位及形态大小。摄取X线蝶鞍或头部CT可检查垂体病变。
4.核磁共振图像 可以鉴别肿瘤或增生，癌症时可见较大肿瘤。用核素标记胆固醇的肾上腺扫描，两侧放射性相仿提示增生，一侧放射线浓集，一侧很少或完全无放射性提示肿瘤。