2016肿瘤细胞凋亡实验攻略

概述

恶性肿瘤已成为因病死亡死因顺位的第一位，而且目前仍有为数众多的肿瘤患者不能得到专业、系统、有效的治疗。肿瘤患者数量的增长、肿瘤治疗的长期性造成肿瘤治疗业务需求市场的长期稳定发展。细胞凋亡是为了维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡，今天我们一起来分享肿瘤细胞凋亡实验攻略，希望能和大家一起来共同学习和探讨。

步骤/方法：

1 细胞凋亡是一个的主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，而不是病理条件下，自体损伤的一种现象，主要是为了更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。

2 细胞处理，将6孔板中的培养基收集到2.0mL的离心管中，每孔加1.0mLPBS洗涤细胞，再加200ul的胰酶进行消化，具体时间视情况而定。待消化好，加2ML的培养基终止消化，吹打细胞，将细胞混悬液加入2mL离心管中，4℃，1200r/min,离心5min，弃去培养液。

3 细胞染色，用冷的PBS洗2次，然后用1X的结合液重悬细胞，一般结合液加入体积500-800mL。将100ul细胞悬液转移至1.5ML离心管中，加5uL的FITCAnnexinV和5ul的PI，轻轻涡旋细胞且避光，常温25℃的条件下孵育15min，每管加400ul的1X结合液，最后进行流式分析。

注意事项

AnnexinV检测细胞早期凋亡，将AnnexinV进行绿色荧光（FITC或EGFP）标记；PI检，测凋亡中晚期的细胞和坏死细胞，可透过细胞膜而使细胞核染红，AnnexinV与PI匹配使用，可以将处于不同凋亡时期的细胞进行区分。