直接镜检。女性用较长的消毒棉拭子取阴道、宫颈分泌物或阴道壁上乳白色薄膜，男性刮取阴茎龟头、冠状沟或包皮处皮损表面鳞屑作为待检标本。将待检标本用10%氢氧化钾或生理盐水制片，镜下可见成群的卵园形孢子和假菌丝，如找到较多的假菌丝时，说明念珠菌处于致病阶段，对诊断更有意义。
1.直接检查法：是临床最常用检验方法，阳性检出率为60%。其优点是简便，快捷。
(1)盐水法：取外阴阴道分泌物少许，涂于载物玻片上，加1～2滴生理盐水调和。
(2)氢氧化钾法：取少许凝乳状分泌物，放于盛有10%KOH或生理盐水玻片上，混匀后在显微镜下找到芽孢和假菌丝。由于10%KOH可溶解其他细胞成分，假丝酵母菌检出率高于生理盐水，检查无症状寄居者的阳性率为10%，而有症状的阴道炎阳性检出率为70%～80%。
2.菌种鉴别实验：如需确定分辨假丝酵母菌的种类，必须进行发酵试验、同化试验，并就其菌落形态特征进行鉴别。
3.测定pH 值：具有重要鉴别意义，若pH 值<4.5，可能为单纯假丝酵母菌感染，若pH 值>4.5，并且涂片中有多量白细胞，可能存在混合感染。
4.培养法：如疑为假丝酵母菌性阴道炎，多次检查均为阴性，可作真菌培养。取标本接种于沙氏培养基上，放入 37℃温箱内，24～28h后观察，可见大量小而白的菌落，取之进行显微镜镜检。培养阳性率几乎均可达100%。作假丝酵母菌培养主要是观察菌落形态、颜色、气味及显微镜下的表现。先放大10倍下检查整个培养板，这已足够能分辨酵母菌细胞、假菌丝体及原壁孢子。进一步可通过生化法检测糖、含氮化合物及维生素的消耗量来分辨不同种属。
通常，如果患者有典型的临床表现，且在显微镜下见到芽孢和假菌丝即可做出诊断，不需再作培养，以减少不必要的有关费用支出。但是，由于显微镜检查并非是一种很敏感的方法，因此也常需作真菌培养来确诊。
5.革兰染色法：此方法阳性检出率为80%。取分泌物涂片、固定后，革兰染色，置显微镜下观察，可见成群革兰染色阳性的卵圆形孢子和假菌丝。
温馨提醒：随着现代医学进步，各种脏器移植术，心脏外科以及各种导管技术开展，生殖器念珠菌病发病率有日益增多的趋势，故我们应该在今后引起注意。