暗视野检查：最确切的诊断方法是从早期获得性或先天性梅毒损害中，发现形态和活动典型的螺旋体。一期梅毒以及二期和先天性梅毒湿润的黏膜损害，暗视野检查(dark field examination)常能取得阳性结果。二期梅毒淋巴穿刺，有时亦为阳性。但一期梅毒时，亦可由于患者对损害处用过肥皂或其他毒性化合物，而使检查得出假阴性结果。因此一次阴性结果不能排除梅毒。对有可疑损害而暗视野初查阴性的病例，最好关照不要清洗病损处，每天回来，连续检查两次。但在临床实践中，对高危对象(吸毒者，同性恋活跃男子)在进行血清学检查后，即对其疑似损害径予治疗更为稳妥。口腔特别是龈缘附近亦可有螺旋体存在，形态学上与苍白密螺旋体无异，通常应由临床表现、病史及血清学试验做出诊断。
作暗视野检查时，可疑溃疡性损害表面应以盐水纱布清洁，不要造成出血。因如标本中有红细胞存在，少量苍白密螺旋体即难以窥悉。挤压损害(戴手套操作)有助于取得浆液，置玻片上，覆以盖玻片，即可以暗视野显微镜检查。活的苍白密螺旋体来回缓渐性运动，沿其长轴作旋转运动而不是在中心部位90°突然屈曲。由于临床医师多无适当设备，也不熟悉暗视野检查技术，故应请公共卫生部门协助。
活检及病理标本荧光素标记抗体染色或银染，亦可发现苍白密螺旋体(图24，25)。
