应根据眼部、角膜表现、全身体征、性乱史、患者或患儿父母性病史等，并结合以下检查进行鉴别和诊断。
1.快速血浆反应素(rapid plasma reagin，RPR)试验 为VDRL试验的改良法，可使用血浆。原理是用未经处理的药用碳颗粒(直径3～5µm)吸附VDRL抗原。此颗粒若与待检血清中的反应素结合，便形成黑色凝集块，肉眼即可识别，不需低倍镜观察。试验在专用纸卡的反应圈(内径18mm)内进行。此试验敏感性高，具一定特异性，而且经济、方便、快速、适合大规模筛选且能定性或半定量。
2.脑脊液检查 可用于神经梅毒。
3.组织病理检查 活组织检查有时能发现组织中梅毒螺旋体，多用嗜银染色。但染色后菌体易与弹力纤维混淆，可采用特殊的免疫荧光或免疫过氧化物酶染色，但标本不能被冷冻。
4.暗视野显微镜检查 一期、二期梅毒和早期先天性梅毒应采用暗视野显微镜检查皮损分泌物中的苍白密螺旋体，阳性者应见到有规律螺旋运动的病原体。暗视野检查简便、快捷而准确。一处皮损只有连续3次检查后仍未发现梅毒螺旋体才能判为阴性。暗视野显微镜检查法不适合用于口腔黏膜的损害，因为显微镜下见到的梅毒螺旋体无法与口腔中非致病的螺旋体区别。应注意检查前皮损部位不能外用抗生素，或使用含抗生素的生理盐水作为检查的载液。标本中已死亡的梅毒螺旋体可用直接或间接免疫荧光染色
或免疫过氧化物酶染色法鉴别。
5.血清学检查即康-华氏反应 病灶处取材，光学显微镜暗视野油镜下检查螺旋体。房水、玻璃体取材，荧光素标记抗体直接染色，荧光显微镜检查螺旋体。