目前临床对HTLV-Ⅰ或(和)Ⅱ感染的检测多采用抗体检测法和外周淋巴细胞病毒核酸检测法。
1、外周淋巴细胞病毒核酸检测
PCR：主要用于检测标本中整合的病毒基因序列，如病毒基因两端的长末端重复序列(LTR)、外膜蛋白(env)、gag、pol和tax序列等，设计不同的引物和探针可对HTLV-I，Ⅱ不同亚型进行鉴定，HTLV感染后病毒基因在细胞内的整合形式决定了PCR引物的选择，一般采用两种不同的基因引物，其中应包括LTR和/或env。PCR灵敏度和特异性都较高。常用于其它，HTLV-l/Ⅱ检测方法的评价。PCR对整合原病毒DNA的检测有助于动态观察患者病程，并对患者的预后作出合理的评价。但PCR的操作复杂、成本高，且容易污染出现假阳性。不适于常规使用。因此目前多用于HTLV感染的确证试验。而不适于作为筛检试剂。另外。由于HTLV感染者极少出现病毒血症。因此PCR不能用于库存血清的检测。
2、HTLV抗体的检测
由于HTLV—I和HTLV一Ⅱ基因组的同源性超过60%。两型病毒在抗原性上高度交叉，利用HTLV—I抗原可以检测出90%的HTLV一Ⅱ感染者。在血清学检测，一般是利用HTLV—I抗原代替HTLV一Ⅱ。
中和试验(NT)：抗原多采用病毒包膜糖蛋白。HTLV-Ⅰ特异性中和抗体在HAM/TSP患者的血清中最易检测到(100%)。
酶联免疫吸附试验(ELISA和胶质颗粒被动血凝试验(PA)：是HTLV—I，Ⅱ抗体检测的初筛试验，抗原多采用病毒特异性蛋白，采用最多的抗原是gp46、p21e、p24和pnOtax。该方法敏感性高，但特异性较低，适用于大规模的初筛鉴定。
Western blot技术：主要是通过转印技术将病毒标准株的特异性蛋白电泳带转移到特定载体上，再与患者血清进行反应，从而达到检测患者血清中HTLV特异性抗体的目的。Western blot主要用于血清筛选后的验证试验，也是HTLV和HIV鉴别诊断的主要方法之一。
3、病毒分离：
从患者血液中获得淋巴细胞，经植物血凝素(PHA)或是患者的淋巴细胞细胞培养。用免疫电镜直接观察病毒颗粒，也可利用标准血清，通过间接免疫荧光法(IFA)、检测细胞中的病毒抗原。混合培养多用于观察病毒对正常T细胞的转化作用。