1.直接镜检 将可疑食物、呕吐物、粪便作涂片、革兰染色，在显微镜下，根据细菌形态、排列及染色特性检出葡萄球菌，一般要求超过其他菌数25%，每克食物含菌应达数亿，诊断即可成立。
2.细菌培养 可疑食物、呕吐物或粪便经高盐血琼脂培养基或用氯化锂盐蛋黄培养。如未检出葡萄球菌，并不能否定诊断，因细菌在食物加热时葡萄球菌被杀灭，但肠毒素耐高温，未能破坏，仍能致病。
3.毒素测定 血清学试验 应用血清学直接检测食物浸出液、培养物或滤液等标本的肠毒素。①反向间接血凝法：用各种型肠毒素的免疫球蛋白致敏鞣酸处理过的红细胞，后加入被检的含肠毒素的标本，经一两小时血细胞凝集阳性，可作快速诊断。②免疫荧光法：用荧光素标记的抗毒素血清与葡萄球菌培养物或食物滤液进行混合，在荧光显微镜下，检查肠毒素。③放射免疫法：用125I标记的肠毒素通过放射免疫法检查肠毒素。
动物实验 取可疑食物或呕吐物接种肉汤培养基，孵育后取滤液注射猫腹腔，4h发生食物中毒症状，提示可能存在肠毒素。
