1.气耳镜检查或显微镜检查
鼓气耳镜检查方便易行，是分泌性中耳炎的主要诊断方法，也是社区检查鼓膜的首选方法。它可以改变外耳道的气压，观察鼓膜的活动情况。如发现鼓膜动度减低，同时伴有鼓膜内陷、色泽由正常的灰白色半透明状改变为橘黄色或琥珀色，见到气液平面或气泡即可诊断。与普通耳镜相比较，鼓气耳镜有着更高的敏感度和特异度。
2.声导抗测试
声导抗测试是反映中耳功能的快速、有效的客观测听方法。由于鼓气耳镜对于2岁以下儿童的鼓膜和中耳情况判断困难，声导抗则提供了方便的测试。声导抗的鼓室压图可呈B型和C型。开始时咽鼓管功能不良或堵塞，中耳气体被吸收形成负压，鼓膜内陷，鼓室压峰压点向负压侧位移，以C型曲线多见。当病变逐渐进展，鼓膜更加内陷，出现鼓室积液，传音结构质量增加而使声导抗进一步增加，鼓室劲度加大，鼓膜和听骨链活动降低，峰压点就越偏向负值，当声顺减弱或无变化时则成为无峰的B型图。
一般认为，如鼓室导抗图为B型，结合临床可诊断为分泌性中耳炎。但是，新生儿和婴儿出生后外耳和中耳结构发生了一系列的改变，如1岁以内婴儿外耳道大小和直径的增加，使其顺应性也发生变化，导致外耳道共振增益和共振频率发生改变；随着生后6个月内鼓膜到镫骨底板距离的增长，增加了中耳含气腔，扩大了中耳腔的容积，此时乳突气化也增加，中耳腔容积增加使鼓膜的顺应性和控制低频传导方面受到重要影响；此外，中耳腔中存在的羊水和间叶细胞逐渐消失（可持续到生后5个月），也使得中耳总质量减少；镫骨密度降低，质量减少；听骨链关节之间和镫骨底板附着到卵圆窗上的紧密程度也在改变，这些都减少了抵抗成分。因此，常规的226Hz探测音测试的鼓室图不能真实地反映6个月以内婴幼儿中耳有无病变和中耳功能。因此大于4个月患儿使用226HZ的探测音，小于4个月的患儿使用高频率的探测音（1000Hz）。这样可使检查结果更加准确。
3.鼓膜穿刺或鼓膜切开术
在耳显微镜或内镜下，于鼓膜前下方进行穿刺或切开，若有浆液样或黏液样液体流出则可证实分泌性中耳炎的存在。其为一种有创性诊断方式，但鼓膜穿刺术是临床诊断中的金指标，不但可以明确诊断，同时可以达到治疗目的。
4.鼻咽部检查
成人患者，用鼻内镜或多功能纤维鼻咽镜直接观察鼻咽部及咽鼓管咽口情况。排除鼻咽部占位性病变。
5.颞骨高分辨率薄层CT
单侧顽固性分泌性中耳炎，经过治疗无效，应警惕黏膜下型鼻咽癌累及咽旁间隙，压迫咽鼓管。如鉴别诊断需要，或需要排除鼻咽部和咽旁间隙占位者，颞骨高分辨率薄层CT可了解中耳情况，将CT片调到软组织窗时可观察咽旁间隙有无占位。必要时需进行增强扫描。
