发布时间:2018-08-02 08:09:49
在生物学上,有三种有机溶剂能够抽提DNA,分别是苯酚、氯仿以及异戊醇,它们采用的原理是通过加有机溶剂,过滤多糖,蛋白等其它物质,然后加入乙醇将核酸分离提取出来。今天小编主要是给大家讲解DNA提取中氯仿的作用,在提取中需要注意的事项,我们一起往下了解:
氯仿的作用是战胜酚的缺陷,加快有机相与液相的分层,最后用氯仿抽提出DNA。这是由于酚易溶于氯仿中,可以快速去掉核酸溶液中的迹量酚。酚和氯仿都是非极性分子,而水是极性分子,在蛋白水溶液和氯仿或者酚适当混合时,氯仿可以挤掉蛋白质和蛋白质分子间的水分子,使蛋白失掉水合情况而变性。虽然酚的变性作用比氯仿要大,可是酚和水相相对水平的互溶,大体10%到15%的水会溶解于酚相中,因此丢失了这部分水相中的DNA,而氯仿就不一样,虽然变性作用没有酚那么好,但氯仿不会和水相互混溶,所以不会带走部分DNA。
经酚第一次抽提后的水相中有残留的酚,由于酚与氯仿是互溶的,可用氯仿第2次变性蛋白质,现在一同将酚带走。加入异戊醇能减小分子表面张力,因而能减少抽提流程中的泡沫发生。通常选用氯仿与异戊酵为24:1的比例,这是因为异戊醇可以帮助分相,使离心后的上层水相,下层有机溶剂相,中层变性蛋白相保持稳定的层次。
关于DNA提取过程中氯仿的作用,还有氯仿与酚的区别,以及它在使用过程中所需要注意的事项,小编在文章中已经详细为大家解答了,希望大家能够认真阅读。小编相信对于需要做类似这种实验的读者来说,掌握这些知识还是很有必要的。
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