(一)首要检查
1.一般实验室检查
(1)血糖测定：临床上一般用静脉血浆葡萄糖浓度表示血糖浓度。血糖测定是胰岛细胞增生诊断最基本的检查，多于空腹或低血糖发作时测定，其中症状发作时是血糖测定的最佳时机。
(2)口服葡萄糖耐量试验：本试验主要价值在于鉴别各种原因的低血糖症。
(3)血浆胰岛素测定：正常人空腹血浆免疫反应胰岛素(IRI)浓度为5~10mU/L，很少超过30mU/L，胰岛细胞增生时血浆中浓度升高。
(4)C肽测定及血浆胰岛素原测定：正常人胰岛素原/胰岛素比值<22%，胰岛细胞增生时血浆中胰岛素原、C肽及胰岛素原/胰岛素的比值均有明显增加。
2.激发试验
(1)饥饿和运动试验：患者晚餐后禁食，次晨8时测血糖。如无明显低血糖，则继续禁食并密切观察，每4小时或出现症状时测血糖。如仍不出现低血糖，则在禁食后12、24、36、48小时各加做2小时运动，以促进发作。如果禁食72小时仍无发作，则本病的可能性很小。
(2)胰高血糖素试验：静脉注射胰高血糖素1mg，50%~75%的胰岛素瘤病例在注射后5分钟血清胰岛素水平升至160mU/L以上或者在注射后 30、40、60分钟分别较注射前增加60、40、20mU/L以上。与此同时血糖升高不明显，试验完后往往低血糖持续较长时间。
(3)亮氨酸试验：在30分钟内静脉注射亮氨酸200mg/kg，如血葡萄糖降低1.39mmol/L以上，血浆胰岛素增加>30mU/L以上，或在30、60、90分钟时，血浆胰岛素分别增加20、15和10mU/L，强烈提示胰岛素瘤的诊断。约80%的本病患者呈现对亮氨酸的过度反应。
(4)甲笨磺丁脲(D860)试验：在2分钟内静脉注射D860 1g，以后第1小时内每15分钟，以及第2、3小时内每30分钟测血糖和胰岛素，并在开始15分钟内每5分钟加测血浆胰岛素。达到下列三项指标者提示为胰岛素瘤：①血浆葡萄糖下降至基础水平的65%以下或小于1.67mmol/L;②血糖下降至2.22mmol/L以下持续3小时以上(如有低血糖症则终止此试验);③血浆胰岛素上升，开始15分钟内增加至I95mU/L或持久升高，30分钟时较基础值增加50mU/L,45分钟增加25mU/L,60分钟增加15mU/L。
(二)次要检查
组织病理学检查 胰岛细胞增生的病理改变是胰岛细胞增生，镜下示胰岛细胞增生，并见有个别胰岛岛细胞肥大，伴有轻度淋巴细胞浸润。胰岛中央见有不规则的蜕变区。有经验的病理医生可由此判断有无胰岛细胞增生。
(三)检查注意事项
1.空腹或发作时血糖低于3.33mmol/L(60mg/dl)、临床上不能排除者，应连续5日以上测定空腹血糖，如多次血糖在2.22mmol/L(40mg/dl)以下时，则诊断的可能性较大。
2.由于胰岛素分泌常呈周期性与脉冲性，外周血中峰值和最低值可相差5倍，以致一次测定血浆胰岛素可不出现增高;另外，肥胖者、肢端肥大症、库欣综合征、妊娠后期、口服避孕药者也可出现高胰岛素血症。因此，单纯根据血浆胰岛素测定不能诊断胰岛细胞增生。
3.在儿童病例，亮氨酸试验不能鉴别胰岛细胞增生与胰岛素瘤。误服磺脲类药物的正常人也可以出现亮氨酸试验阳性。
4.D860试验需注意下列几点：①患者空腹血糖<2.7mmol/L，不应该进行此试验;②试验中一旦意识丧失或有低血糖的症状发作立即停止试验，并给予葡萄糖口服或静脉注射;③静脉注射D860试验危险性较大，注射D860以后接上生理盐水保持输液通畅，一旦低血糖发作时能及时注入葡萄糖或胰高血糖素。
5.各项影像学检查均无异常时，应考虑胰岛细胞增生的可能。