2013-03-26 22:40:12
真菌学检查
(一)病原菌检查
在各种标本中如能找到新生隐球菌，则对诊断有决定意义。
1.直接镜检：取脑脊液标本少许置玻片上，加一滴墨汁混匀后，加盖玻片。一般新生隐球菌在镜下即可见圆形或椭圆形的双层厚壁孢子，外有一层宽阔荚膜，边缘清楚完整，菌体内可见单个出芽；若为新生隐球菌上海变种，则菌体呈棒形、针形、梭形、瓢形、圆球形及出芽现象。如脑脊液直接制片未发现菌体，可离心沉淀(3000r/min，10min)后重复检查。
2.菌体计数：脑脊液菌体计数是判断预后及疗效的重要指标。
染液配制：黑色墨水8ml，甘油2ml，蒸馏水2ml，混合摇匀，密封保存备用。
操作方法：将脑脊液标本摇匀，用吸管吸取一定量置于小试管中，另加进等量的染液，混匀。用血细胞计数板计数，在低倍镜下观察。按白细胞计数法，将两个计数板四角的4个大方格及中央大方格(共10个大方格)中的菌数相加，再乘以2，即为每立方毫米脑脊液内的隐球菌数。
3.培养：培养基内可加氯霉素，但不可加放线菌酮，因后者抑制本菌生长。取各种标本同时接种于葡萄糖蛋白胨斜面培养基上，置28～37℃孵育2～4d开始生长。若不生长，可将培养管适当振荡，便标本与培养基充分接触再进行培养，少数病例的标本在2～3周内生长。
(二)脑脊液常规
中枢神经系统隐球菌病脑脊液压力增高，一般为1.96～4.9kPa以上。外观正常或微混，亦可为乳白、淡黄或红色。白细胞数增多，大都在3×108/L以内，少数达2×109/L以上，早期以中性粒细胞为主，中后期以淋巴细胞为主，可达88%～90%。糖和氯化物在早期变化不明显，中后期可明显减少，特别是糖含量可显著降低，甚至为零。蛋白含量在病程中后期增高。
(三)实验室检查
血细胞计数轻度或中度增高，大部分病例在(1～2)×1010/L之间，少数可达2×1010/L以上。部分患者血沉可加快。中后期可出现血红蛋白及红细胞数减少。
(四)抗原检查
胶乳凝集试验检测脑脊液新生隐球菌荚膜多糖抗原，是一种简便、快速、有效诊断隐球菌性脑膜炎的实验室方法。它以胶乳颗粒为载体，表面联接有抗新生隐球菌抗体，形成致敏胶乳悬液，当与患者脑脊液标本作用时，如标本中含有一定量的隐球菌荚膜多糖抗原，则可产生肉眼可见的凝集反应颗粒。
(五)抗体检测
检测脑脊液抗新生隐球菌抗体有助于诊断或病情变化判断，抗体滴度升高表明病情好转。检测方法有凝集反应，间接萤光试验，补体结合试验，间接血凝试验以及酶免疫方法，但阳性率不高！